• /  3
  • 下載費用: 9.9積分  

多囊卵巢綜合征患者脂肪組織TNFR2mRNA的表達及其意義.doc

'多囊卵巢綜合征患者脂肪組織TNFR2mRNA的表達及其意義.doc'
?臨床醫學論文?多囊卵巢綜合征患者脂肪組織TNFR2mRNA的表達及其意義作者:王竹晨 顧熊飛 楊冬梓 邙健全【關鍵詞】多囊卵巢【摘要】目的 硏究多囊卵巢綜合征(PCOS)脂肪組織腫瘤壞死因子受體U (TNFR2) mRNA的表 達,從分子水平探討PCOS患者發生胰島素抵抗(IR)的分子生物學機制。方法采用RT-PCR技術 結合內對照,半定量檢測PCOS及其對照組脂肪組織WFR2mRNA的表達。結果7NFR2mRNA的表達量 在PCOS肥胖組(0.90±0.12,PvO.OOl)和PCOS非月凹半組(0.62±0.14,P0.05)。結論PCOS兩組脂肪組織 WR2mRNA的表達均較 非肥胖對照組增強,口以PCOS肥胖組升高史為明顯,高水平的腫瘤壞死因子a (TNFa )可能通 過上調TNFR2促進PCOS者TNF a系統活性增強。關犍詞多囊卵巢綜合征咦島素抵抗腫瘤壞死因了受休II mRNA腫瘤壞死因子a .[Abstract] Objective We study the expression of TNFR2mRNA in adipose tissue from PCOS to get insight into the mechanism of IR in PCOS at the molecular biological level.Methods We survey the expression of TNFR2mRNA in adipose tissue by semi-quantitative RT-PCR technique with inner?control.Results The expression of TNFR2mRNA inadipose from the obese PCOS group (0.90+0.12,P<0.001) and the nonobese PCOS group (0.62±0.14,P<0.05) is markedly higher than the nonobese control group (0.50+0.15),and the obese PCOS group prese nts more in crease ( P0.05) .Conclusion These results suggest that the expression of TN FR2mRNA in adipose tissue from PCOS patient isabnormally excessive.The high TNF a could up-regulate TNFR2which amplified the activity of TNF a in PCOS women.Key words polycystic ovary syndrome adipose tissue insulin resistance tumor necrosis factor receptorIImRN.A tumor necrosis factor alpha多奏卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome, PCOS)是以高雄激素血癥和不排卵為特點的 —組綜合征。日前認為PCOS是以朕島索抵抗(Insulin Resistance, 1R)為特征的內分泌代謝疾 患,繼發于IR的高胰島素血癥對造成高雄激索征象起著重要作用[1] o腫瘤壞死因子a (Tumor Necrosis Factor alpha, TNFa )是一個具有廣泛生物活性的多肽,近年來大量的研究結果提示, TNFa還可能是IR的巫要發病機制Z—。在肥胖的人和鼠,增多的TNFa選擇性地上調了腫瘤壞 死因子受體II (Tumor Necrosis Factor ReceptorTI, TNFR2),且 TNF a 和 TNFR2mRNA 水平 與IR呈正相關[2] o Fernandez-Real [3]等報道肥胖患者血TNFR2水平較TNFa升高更 為明顯,并與ISI呈負相關,可作為肥胖患者TNFa相關IR的預測指標。為探討TNFR2與PCOS 患者IR的發病關系,我們對PCOS脂肪紐織TNFR2mRNA的表達進行了研究,現報告如卜。1資料與方法1.1實驗對象與組織來源 收集婦科病房2000年3月?2001年7月PCOS患者24例,臨床 癥狀及內分泌檢查均符合PCOS診斷,術后病理檢査證實為多囊卵巢。診斷標準是:(1)月經稀 發或閉經和(或)多毛,肥胖;(2)不孕或持續基礎體溫(BBT)單相;(3)血清LH異常高,LH/FSH>2? 3和/或高雄激素血癥;(4) B型超聲檢査證實冇卵巢多囊改變,表現為卵巢增大,包膜冋聲增強, 可見單側卵巢泡數列0個,直徑2?8mm,圍繞卵巢邊緣,有時散在分布于卵巢內[4] 。24 例PCOS患者據體重指數[體巫/身高(kg/m 2 )]分為肥胖組(體巫指數>24kg/m 2 )和非月巴 胖組(體巫指數<24kg/m 2 )各吃例;另隨機收集婦科病房診為卵巢逖腫或輸卵管阻塞行開腹手 術的肥胖和非肥胖婦女各12例。上述齊組均無其它急慢性疾病。術中開腹時切取皮卜脂肪組織適 量,迅速置液氮中凍存。4紐的臨床資料見表1。山表1可知,PCOS兩組分別與其體巫相匹配的 對照組相比,年齡和BMI均無統計學差異。1.2 主要試劑及儀器 TRIzoc Reagent (Gibco) ;Titan One Tube RT-PCR kit(Roche) ;PCR Marker (TakaRa DL2000DNA Marker);焦碳酸二乙酯(DEPC)(AMRESCO) ;DNA上樣緩沖液(TdknRd);氯仿、異丙醇、無水乙醇等均為新開瓶 國產分析純試劑:Ti p頭和EP管等均經DEPC處理,除去RNA酶污染;有關其它物品 也經高溫干烤滅活RNA酶。RNA樣品緩沖液(250//I甲酰胺,83“137%甲醛,50”11 OxMOPS 緩沖液,0.01 %漠酚藍);10xTBE 貯存液(108g Tris 堿,55g 硼酸,40 “ I0.5 “ mol/L EDTA (pH0.8)力DDEPC 處理水至 1L)。10xMOPS (0.2mol/L,3-CN-嗎咻代)?丙磺酸(MOPS), 50mmol/L乙酸鈉,10mmol/L EDTA (pH7.6)。主要儀器有PCR擴增儀(Hema480);凝膠成像 分析系統(UVP-GDS8000),低溫離心機(HARRIS) ;DNA/蛋白分析儀(Beckman DU530)。表1各組的臨床資料(x±s)1.3方法〔5〕1.3.1脂肪組織總RNA的提取及鑒定(1)取出液氮凍存的脂肪組織1g,加入5ml TRIzol, 電動勻漿,12000g低溫離心10min >吸出清亮的均一水和部分至另一離心管中,室溫孵育5min;(2)加入1 ml氯仿,劇烈振搖15s,室溫靜置3min,12000g低溫離心15min; (3)小心吸取上 層無色水相至另一離心管中,加入25ml異丙醇,混勻,室溫靜置10min,12000g低溫離心10min;(4)小心棄掉上清,加75%乙醇5ml,振勻,洗滌RNA沉淀,7500g低溫離心5min,棄去上清, 沉淀經空氣干燥1 min溶于適量DEPC處理水中;(5 )DNA/蛋白質分析儀確定每次樣品中A260/280 比率大于1 -8,并測定所抽提總RNA的濃度,DEPC處理水將各樣品總RNA配制成0.5 “ g/“ I, 分裝后M-70cC保存備用。(6) RNA變性電泳取17//IRNA樣品加3//IRNA樣品緩沖液,65°C 變性15min,冰浴中冷卻后上樣,1.5%甲醛變性瓊脂糖凝膠(1.5g瓊脂糖,10ml10xMOPS,73ml DEPC處理水-微波爐化膠后冷卻至60t,加17ml37%甲醛,5“l EB-倒板制膠)70V電泳, 電泳道1和泳道2的上樣量分別為15“ I和5“ I緩沖液為IxMOPS,觀察RNA的完整性。1.3.2引物設計及建立內對照TNFR2和/3-actin引物均由上海生工合成。(1 ) TNFR2引物 序歹!1:上游弓 I物 5 " ( 591 ) ACGTTCTCCAACACGACTTCATC (613)3";下游弓 |物 5 " (940) ATGATGACACAGTTCACCACTCC (918) 3 ';預擴t曾片斷為 349bp。(2) /3-act泊弓|物序歹 上游弓I物 5 " (74) ATGGAT GATGATATCGCCGCGCT (96) 3^ ;下游弓[物 5 " (723) CACAGCTTCTCCTTAATGTCACG ( 701 ) 3 ";預擴增片斷為649bp。引物設計均采用有關核酸 序列分析軟件計算機輔助設計。經對人類基因庫掃描檢查未發現其它同源序列。1.3.3反轉錄哆聚酚鏈反應(RT-PCR)(1)RT-PCR反應休系:混合物1,H 2 04.5“ I,dNTP4 “I,DTT solution2.5I,RNase inhibitorl “I ? TNFR2up
關 鍵 詞:
tnfr2mrna tnfr 組織 脂肪 mrna 表達 患者 綜合征 及其 意義
 天天文庫所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:多囊卵巢綜合征患者脂肪組織TNFR2mRNA的表達及其意義.doc
鏈接地址: http://www.094347.live/p-53653597.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服點擊這里,給天天文庫發消息,QQ:1290478887 - 聯系我們

本站為“文檔C2C交易模式”,即用戶上傳的文檔直接賣給(下載)用戶,本站只是中間服務平臺,本站所有文檔下載所得的收益歸上傳人(含作者)所有【成交的100%(原創)】。本站是網絡服務平臺方,若您的權利被侵害,侵權客服QQ:1290478887 歡迎舉報。

[email protected] 2017-2027 http://www.094347.live 網站版權所有

粵ICP備19057495號 

收起
展開
有没有苹果软件赚钱的 甘肃省快3走势图 河北快三开奖结果河北快三走势开奖结果 排列五走势图 华夏配资网 河北快3 时时彩软件最新版 pk10两期在线人工计划 福彩河北20选5最新开奖 江苏11选5一定牛 天津十一选五和值走势